保祿第一次出外傳教是在公元45至48年間，以敘利亞安提約基雅為起點及終點，前往了塞浦路斯島及小亞細亞（宗13-14章）。開始時，領導人是巴爾納伯，但在旅程結束後，無疑地，保祿成為了這次傳教工作的領袖。從這時開始，路加也開始以他的羅馬名字「保祿」來稱呼他。他們每次傳教都是在猶太人的會堂講道，這次傳教有了初步成果 (宗13:12)。後來保祿和隨行的人從塞浦路斯島乘船到小亞細亞，在旁非里雅的培爾革上岸。他們並沒有久留，便前往安提約基雅去。這時候，馬爾谷卻離開他們，回到耶路撒冷 (宗15:36-39)。馬爾谷離去的原因很可能是因為保祿改變了原有的計劃。
保祿在丕息狄雅的安提約基雅待了一段短時間，因猶太人拒絕了他的宣講，使保祿和巴爾納伯說出了幾句令人難忘的話：【保祿和巴爾納伯卻放膽地說：「天主的聖道本來先應講給你們聽，但因你們拒而不受，並斷定自己不配得永生，看，我們就要轉向外邦人。」】(宗13:46) 。最後在安提約基雅和依科尼雍，充滿敵意的猶太人和外邦人說服了當時的首長把他們驅逐。在這次旅程的最後一站，呂考尼雅的呂斯特辣和德爾貝，保祿和巴爾納伯首次來到一個純粹是外邦人的地方。過了一段時間，在安提約基雅和依科尼雍的猶太人隨後而來，將他們驅逐，還差一點殺害了他們。
大約在公元49年，保祿回到派遣他們的安提約基雅教會後，在皈依基督的外邦人應否行割損禮這個問題上，和他們起了激烈的辯論（宗15:1-6）。結論是，外邦的信友只須遵守【戒食祭邪神之物、血和窒死之物，並戒避奸淫；若你們戒絕了這一切，那就好了。】（宗15:28-29）。史稱這會議為「耶路撒冷宗徒會議」。而宗徒的決定則稱為「宗徒指令」。保祿立下向外邦人傳教的政策，歸化的外邦人，無須遵守梅瑟的法律和割損禮。